精品国产99_国产一区涩涩涩_日韩二区_国产99这里只有精品_熟女456无码不卡99久久_国产在线ww_亚洲中文字幕se_日本爽爽爽爽爽爽在线电影_一本道麻豆_秋霞在线视频看看1区_午夜日韩无码你懂的_日韩欧美五十路一区_日韩精品 A片在线,娇妻主动扶着粗大挺进视频,韩国理论电影中文字幕,少妇高潮一区二区,欧美一区二区三区一级片,一级毛片大全免费播放,无码免费人妻片毛,男人天堂成人,国产免费片好硬好爽好深小说,婷婷综合亚洲,影音先锋亚洲AV少妇熟女,亚洲中文字幕无码日韩精品,日韩人妻无码一区二区免费,久久老子无码午夜伦不卡,国产成人综合自拍,射熟女,欧美日韩一级免费看,在线无码精品人妻一区二区三区,午夜不卡片免费视频,日本欧洲亚洲大胆,久久人妻无码高清加勒比,国产欧美精品亚洲日本一区,日韩AAAA色情,亚洲熟妇无码乱子AV电影,亚洲精品 欧美日韩,亚洲乱码国产一区三区,亚洲国产精品无码在线一区,色偷偷在线视频直播,女人本色高清在线播放,久久成人做爰电影图片,国产老女人一区二区片

一、 復(fù)蘇

　　1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。

　　2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

　　4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

　　5. 3天換一次培養(yǎng)基。

二、 傳代

　　1. 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。

　　2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。

　　3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行)，消化1-2分鐘。

　　4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

　　5. 用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來。

　　6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。

　　8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。

三、 凍存

把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。 凍存液的配制： 70%的培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。