1. 準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等；
2. 根據檢測標本數量確定所需試劑的量；
3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑；
4. 標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內無法實驗者，注意低溫保存。
ELISA試劑盒實驗中為了確定較佳信號和背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。
一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
為了優化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
